УСовершенствование лабораторной диагностики туберкулеза крупного рогатого скота




Скачать 389.71 Kb.
Название УСовершенствование лабораторной диагностики туберкулеза крупного рогатого скота
страница 1/3
Дата публикации 16.06.2016
Размер 389.71 Kb.
Тип Автореферат
edushk.ru > Биология > Автореферат
  1   2   3





На правах рукописи

Янченко Татьяна Александровна


уСовершенствование лабораторной диагностики туберкулеза крупного рогатого скота

06.02.02 – ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени

кандидата биологических наук





Новосибирск – 2011


Работа выполнена в ГНУ Всероссийский научно-исследовательский институт бруцеллеза и туберкулеза животных Россельхозакадемии (ВНИИБТЖ).

Научный руководитель: кандидат ветеринарных наук, доцент

^ Таллер Любовь Аркадьевна

Официальные оппоненты: доктор биологических наук

Аликин Юрий Серафимович,
доктор ветеринарных наук, профессор

Луницын Василий Герасимович
Ведущая организация: ^ ГНУ Всероссийский научно-исследовательский

институт экспериментальной ветеринарии

им. Я.Р. Коваленко Россельхозакадемии (ВИЭВ)


Защита состоится « 29 » ноября 2011 г. в «____» часов на заседании диссертационного совета Д.006.045.01 при Государственном научном учреждении Институт экспериментальной ветеринарии Сибири и Дальнего Востока Россельхозакадемии по адресу: 630501, Новосибирская обл., Новосибирский район, п. Краснообск, ГНУ ИЭВСиДВ, а/я 8, тел/факс (383) 348-44-62.
С диссертацией можно ознакомиться в Сибирской научной сельскохозяйственной библиотеке Россельхозакадемии.

Автореферат разослан «___» __________ 2011 г.

Ученый секретарь

диссертационного совета Г.М. Стеблева


  1. ^ ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ


Актуальность темы. Туберкулез крупного рогатого скота занимает особое место среди инфекционной патологии животных. Инфекция длительное время может протекать в латентной форме, не проявляя клинических признаков болезни, не влияя на продуктивность и жизнедеятельность животных. Быстро распространяясь среди поголовья животных, туберкулез искореняется с большим трудом.

В неблагополучных хозяйствах туберкулез крупного рогатого скота наносит значительный экономический ущерб владельцам животных и представляет большую опасность в заражении людей, организация мероприятий по борьбе с этим заболеванием была и остается актуальной проблемой.

Против туберкулеза животных пока не разработано эффективных средств специфической профилактики и лечения. Поэтому, основным звеном в проведении профилактических и оздоровительных мероприятий является своевременная и качественная диагностика.

Одним из основных диагностических подходов является обнаружение микобактерий туберкулезного комплекса в исследуемом диагностическом материале (бронхиальные смывы, мокрота, моча, кровь, лимфатические узлы, кусочки паренхиматозных органов и др.).

Наиболее эффективным методом выявления микобактерий на сегодняшний день является культуральный посев на питательные среды. Также в последнее время широкое развитие получил современный молекулярно-генетический метод – полимеразная цепная реакция (А.С. Донченко и др., 1994, 2004;
В.И. Голышевская, 1995; Л.А. Таллер и др., 1995; В.Г. Ощепков и др., 2001, 2009; Н.П. Овдиенко, А.Х. Найманов и др., 2002; Т.М. Shinnik, 1996).

Выделение микобактерий туберкулеза из патологического материала, в силу генетических и фенотипических особенностей возбудителя, связано с определенными трудностями – это медленный рост на искусственных питательных средах, способность к полиморфизму и длительной персистенции возбудителя в измененной форме (В.С. Федосеев, И.Н. Рубцова, А.Н. Байгазанов, 1988; О.А. Иртуганова, 2006).

В связи с тем, что туберкулез в настоящее время остается огромной проблемой человечества, усовершенствование лабораторной диагностики, направленное на повышение чувствительности известных традиционных методов и сокращение сроков исследования, за счет модификации существующих и разработки новых способов диагностики этого заболевания, является актуальной задачей.

^ Цель и задачи. Целью настоящей работы было усовершенствовать методы выделения и идентификации микобактерий туберкулеза из биоматериала, взятого от животных.


Для достижения данной цели были поставлены следующие задачи:

        1. Разработать питательную среду, позволяющую ускорить выделение и повысить высеваемость микобактерий туберкулеза из биоматериала от крупного рогатого скота.

  1. Разработать метод ускоренного выявления микобактерий туберкулеза на основе комбинированного применения культурального метода и полимеразной цепной реакции.

^ Научная новизна.

Разработана плотная питательная среда, содержащая фитопрепарат – 10%-ный водный экстракт полыни – для ускоренной изоляции типичных и измененных микобактерий туберкулеза, повышающая высеваемость микобактерий из биоматериала животных на 30%. Получен патент
№ 2382076 «Питательная среда для культивирования микобактерий туберкулеза» от 20 февраля 2010 г.

Впервые разработан комбинированный культурально-генетический метод (КГМ), основанный на исследовании «слепых» смывов с поверхности питательных сред в ранние сроки культивирования методом полимеразной цепной реакции. Предлагаемый метод позволяет дополнительно выявлять труднорастущие и некультивируемые формы микобактерий, при этом значительно сокращая сроки исследования до 3-5 суток.

^ Практическая значимость и внедрение результатов исследований.

Повышение высеваемости микобактерий, выделенных из биоматериала от животных и сокращение сроков исследования, позволяет оперативно организовывать противотуберкулезные мероприятия в неблагополучных хозяйствах, а в случае исключения туберкулеза - предотвращать необоснованный убой здоровых животных.

Результаты исследований использованы при составлении методических рекомендаций:

«Комплекс ускоренной дифференциальной диагностики туберкулиновых реакций у крупного рогатого скота в благополучных хозяйствах», утвержденные секцией животноводства Центра научного обеспечения АПК Омской области, протокол № 9 от 15.11.08;

«Методы ускоренного выявления типичных и измененных (L-форм) микобактерий туберкулеза», утвержденные секцией животноводства Центра научного обеспечения АПК Омской области, протокол № 5 от 30.09.10;

Также материалы исследований использованы при проведении научно-исследовательской работы в ГНУ ВНИИБТЖ и учебном процессе Института ветеринарной медицины ФГОУ ВПО ОмГАУ.

Апробация. Материалы исследований доложены на заседаниях ученого совета ВНИИБТЖ г. Омск (2006-2010г.), координационных совещаниях ВИЭВ
г. Москва (2006-2010г.), на научных конференциях профессорско-преподавательского состава и аспирантов Института ветеринарной медицины ОмГАУ (2008, 2010г.), на заседаниях совета молодых ученых ВНИИБТЖ (2006-2011 г.), на межрегиональных научно-практических конференциях ВНИИБТЖ (2007-2010г.), на международной научной конференции молодых ученых,
г. Новосибирск (2010г.). Основные положения диссертации, выводы и практические предложения доложены, обсуждены и рекомендованы к защите на межлабораторном заседании сотрудников ВНИИБТЖ (2011г.).

^ Публикация материалов исследований. По материалам диссертации опубликовано 15 научных статей, в том числе 3 в журналах, рекомендованных ВАК Минобразования РФ («Сибирский вестник сельскохозяйственной науки», «Ветеринария и кормление», «Достижения науки и техники АПК»).

^ Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 114 страницах компьютерного текста и состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований, обсуждения результатов исследования, выводов, практических предложений, библиографического списка и приложений. Работа иллюстрирована 11 таблицами и 13 рисунками. Библиографический список включает 223 источника, в том числе 31 – иностранных автора.

Автор выражает искреннюю благодарность за участие в выполнении некоторых фрагментов диссертационной работы и оказание научно-методической помощи кандидатам ветеринарных наук А.Д. Панкратовой и Е.Ю. Секину, а также сотрудникам лаборатории эпизоотологии и мер борьбы с туберкулезом.

^ Основные положения, выносимые на защиту:

  1. Усовершенствованная плотная питательная среда, содержащая фитопрепарат, для ускоренного выявления микобактерий туберкулеза.

  2. Разработанный метод диагностики туберкулеза у крупного рогатого скота с использованием полимеразной цепной реакции.


^ 2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1 Материалы и методы исследований

Работа выполнена во Всероссийском научно-исследовательском институте бруцеллеза и туберкулеза животных (ГНУ ВНИИБТЖ) в лаборатории клеточной биотехнологии (2006-2008), в лаборатории эпизоотологии и мер борьбы с туберкулезом (2009-2010), часть исследований выполняли в лаборатории диагностических исследований и биотехнологии (2006-2009) в соответствии планом научно-исследовательских работ по заданию 08.01.04 «Создать систему иммунной защиты крупного рогатого скота от туберкулеза с применением молекулярных вакцин. Выявить молекулярно-генетические аспекты паразито-хозяинных отношений при туберкулезе животных и обосновать ускоренную диагностику с учетом изменчивости свойств возбудителя».

Биологический материал для исследования отбирали в хозяйствах Омской и Новосибирской областей с различным эпизоотическим состоянием по туберкулезу животных, а также на мясокомбинате МПЗ «Компур» г. Омска и мясокомбинате г. Калачинска в период с 2006 по 2010 гг.

Для проведения лабораторных исследований был отобран биологический материал: лимфатические узлы и кусочки паренхиматозных органов от 311 голов крупного рогатого скота, положительно реагировавших на ППД-туберкулин. Для эксперимента на лабораторных животных использовали 25 морских свинок.

Кроме этого, для исследования использованы коллекционные, официально зарегистрированные штаммы культур: M.bovis шт.8, M.avium шт.9 (получены в 1986 году в Государственном научно-контрольном институте), а также M.bovis шт.14, M.intracellulare (получены в 1986 году в лаборатории специфической профилактики туберкулеза ВНИИБТЖ).

Бактериологические исследования, включающие бактериоскопический метод, культуральный посев, биопробу на лабораторных животных проводили в соответствии с нормативно-технической документацией.

Предпосевную обработку биологического материала от лабораторных животных и крупного рогатого скота проводили по методу Гона в модификации Левенштейна-Сумиоши.

Для сокращения сроков выделения микобактерий из биологического материала от животных нами сконструированы 4 варианта питательных сред с использованием биологически активных добавок растительного происхождения.

За основу взяты стандартные плотные яичные среды Левенштейна-Йенсена и Фаст-3Л, как наиболее часто используемые в бактериологической диагностике туберкулеза.

В качестве ростостимулирующих добавок изучали 10%-ный водный экстракт полыни и 10%-ный водный экстракт «Лив-52».

Бактериоскопические исследования проводили по методу Циль-Нильсена с оценкой результатов в визуализированной системе с фотодокументированием Axiostar plus Carl Zeiss. Результаты обработаны в программе Axiovision Rel 4.7. Всего исследовано 1200 мазков.

Видовую идентификацию выделенных культур проводили общепринятыми культурально-биохимическими методами (Наставление по диагностике туберкулеза, 2002).

В необходимых случаях, проводили биологическую пробу на морских свинках (всего использовано 98 голов).

Нами проведены исследования по разработке культурально-генетического метода, основанного на сочетании культурального посева на модифицированные питательные среды и полимеразной цепной реакции (ПЦР) с использованием тест-системы «МТБ-КОМ» производства НИИ Эпидемиологии, г. Москва.

Материалом для исследования в ПЦР служили смывы с поверхности питательных сред на 3, 5, 10, 17 сутки культивирования, без видимого роста бактериальных культур. Всего исследовано 327 смывов.

Выявление ДНК Mycobacterium tuberculosis complex проводили методом полимеразной цепной реакции с электрофоретической детекцией продуктов амплификации в агарозном геле. ПЦР-амплификацию проводили на приборе «Ampli-4» производства «ДНК-Технология», Россия.

Экспериментальные данные обработаны методами математической статистики с использованием критериев Стьюдента, средние значения (M±m), достоверность разницы опытных и контрольных показателей (Р) определены с помощью программы Microsoft Excel.

Подробно схемы опытов, методы и методики исследований изложены в соответствующих разделах диссертации.
2.2 ^ РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ
  1   2   3

Добавить документ в свой блог или на сайт

Похожие:

УСовершенствование лабораторной диагностики туберкулеза крупного рогатого скота icon Фундаментальные знания эпизоотического процесса основа контроля туберкулеза...

УСовершенствование лабораторной диагностики туберкулеза крупного рогатого скота icon Эпизоотологическое обоснование и экономическая эффективность рациональной...
Эпизоотологическое обоснование и экономическая эффективность рациональной дифференциальной диагностики туберкулиновых реакций
УСовершенствование лабораторной диагностики туберкулеза крупного рогатого скота icon Особенности проявления диагностических реакций у крупного рогатого...
Работа выполнена в гну институт экспериментальной ветеринарии Сибири и Дальнего Востока со россельхозакадемии
УСовершенствование лабораторной диагностики туберкулеза крупного рогатого скота icon Особенности распространения вирусной диареи-болезни слизистых оболочек...
...
УСовершенствование лабораторной диагностики туберкулеза крупного рогатого скота icon Диагностика респираторно-синцитиальной инфекции крупного рогатого...
...
УСовершенствование лабораторной диагностики туберкулеза крупного рогатого скота icon Мы живём в сельской местности и с ранних лет мы помогаем своим родителям...
«Рентабельность содержания крупно – рогатого скота в домашнем хозяйстве». Выбранная тема показалась нам актуальной, потому что многие...
УСовершенствование лабораторной диагностики туберкулеза крупного рогатого скота icon Парагрипп крупного рогатого скота
В хозяйствах ряда районов заболевание телят парагриппом не только не снизилось, но и приобрело стационарный характер. Нелишне будет...
УСовершенствование лабораторной диагностики туберкулеза крупного рогатого скота icon О проблемах контроля эпизоотического процесса лейкоза крупного рогатого скота
Вернуться к этой теме заставили публикации в «ВК» №15 и №19 за 2006 год Л. Г. Белова и В. Л. Никифоровой «Ретроспективный взгляд...
УСовершенствование лабораторной диагностики туберкулеза крупного рогатого скота icon Рассмотрение проблемы некробактериоза с позиции теории эпизоотического процесса
После прочтения статьи В. А. и А. В. Мищенко «Болезни конечностей у высокопродуктивных коров», опубликованной в журнале «Ветеринарная...
УСовершенствование лабораторной диагностики туберкулеза крупного рогатого скота icon Проекта
Рентабельность содержания крупно рогатого скота в домашнем хозяйстве. Математика и сельское хозяйство
Вы можете разместить ссылку на наш сайт:
Школьные материалы


При копировании материала укажите ссылку © 2013
контакты
edushk.ru
Главная страница

Разработка сайта — Веб студия Адаманов